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农业农村部制定《兽药中非法添加药物快速筛查法》

为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》,保护环境,保障人体健康,规范水中烷基酚类化合物的测定方法,制定本标准。
本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中双酚
A、4-特丁基酚、4-正丁基酚、4-正戊基酚、4-正己基酚、4-正庚基酚、4-正辛基酚、壬基酚、4-特辛基酚和
4-正壬基酚等烷基酚类化合物的测定。 本标准规范性引用文件: 《HJ/T 91
地表水和污水监测技术规范》、《HJ/T 164 地下水环境监测技术规范》、《HJ/T
493 水质采样 样品的保存和管理技术规定》。 方法原理:
水中的烷基酚类化合物在酸性条件下,用固相萃取方式富集、净化,二氯甲烷洗脱,浓缩后,用带有荧光检测器或紫外检测器的高效液相色谱仪测定,根据保留时间定性,外标法定量。
仪器和设备: 液相色谱仪:配备紫外检测器或荧光检测器。 色谱柱:C18
反相色谱柱,250 mm×4.6 mm×5 ?m 或其他性能相近的色谱柱。
浓缩装置:旋转蒸发仪、氮吹仪、全自动浓缩仪或其他性能相当的浓缩装置。
固相萃取柱:250 mg,填料为苯乙烯和二乙烯苯共聚物,或其他等效萃取柱。
固相萃取装置:手动或自动,流速可调节。 微量注射器:10 ?l、50 ?l、100
?l、250 ?l、1.0 ml。 采样瓶:500
ml,细口棕色玻璃瓶,配玻璃塞或者聚四氟乙烯盖子。使用前用 20 ml 丙酮清洗
4 次;亦可在不低于 400℃的高温中烘烤 2
h;或者使用洗瓶机清洗,避免使用表面活性剂类洗涤剂。 样品采集与保存: 按照
HJ/T 91、HJ/T 164 和 HJ/T 493
的相关规定进行水样采集和保存。如采用自动采样设备,必须保证该设备任何部件不吸附目标物。
用采样瓶采集水样,加盐酸溶液调节水样 pH 至
1~2,水样应充满样品瓶并加盖密封,在 4℃以下避光、冷藏保存,14 d
内提取完毕,30 d 内完成分析。
每次采样过程中,需同时采集全程序空白样品,并用与实际样品相同的方式保存,分析。
标准曲线的建立: 移取一定量的烷基酚类化合物标准使用液,用乙腈配制成 20.0
μg/L、50.0 μg/L、100 μg/L、250 μg/L、500 μg/L、1000 μg/L、2000 μg/L
等至少 5 个浓度点(此为参考浓度,其中紫外检测器的标准曲线范围是 100 μg/L
~2000 μg/L,荧光检测器的标准曲线范围是 20.0 μg/L ~500
μg/L),按照液相色谱参考条件,由低浓度到高浓度依次对标准系列溶液进样分析,以目标化合物浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,分别建立紫外检测器和荧光检测器的标准曲线。

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文章摘要:农业农村部公告 第169号
根据《兽药管理条例》规定,农业农村部组织制定了《兽药中非法添加药物快速筛查法……

为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》,保护生态环境,保障人体健康,规范水中联苯胺的测定方法,制定本标准。本标准为首次发布。规定了测定地表水、地下水、生活污水和工业废水中联苯胺的高效液相色谱法。由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。
生态环境部于2019年4月13日批准。自2019年9月1日起实施。 适用范围:
规定了测定水中联苯胺的高效液相色谱法。适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中联苯胺的测定。当取样体积为
150 ml,试样定容体积为 2.0 ml,进样体积为 40 μl 时,方法检出限为0.006
μg/L,测定下限为 0.024 μg/L。 仪器和设备:
1、高效液相色谱仪:具荧光检测器。
2、色谱柱:填料粒径为5μm,柱长15cm,内径4.6mm的C18反相色谱柱,或其他等效色谱柱。
3、样品瓶:500ml具磨口塞的棕色细口玻璃瓶或带聚四氟乙烯衬垫的棕色螺纹口玻璃瓶。
4、微量注射器:10μl、50μl和 100μl。
5、超声波清洗仪:输出功率在180W以上,工作频率为 40
kHz。固相萃取装置。一般实验室常用仪器和设备。 仪器要求:
由于本标准使用荧光检测器,因此要求检测中使用液相色谱仪带荧光检测器。色谱柱为STPAK
C18-ES,4.6 mm I.D.×150
mm,5μm,由于本标准只测定联苯胺,并且使用荧光检测器,因此一般通用的
C18柱就能满足要求。 什么是联苯胺
二氨基联苯俗称“联苯胺”,系联苯的衍生物之一,为IARC第一类致癌物,有强烈的致癌作用,是染料合成的中间体,健康和环境危害显著。为白色或微带淡黄色的稳定针状结晶或粉末,可燃,露置于空气中光线照射时颜色加深,市售商品常呈淡黄色。难溶于冷水,微溶于热水、易溶于乙酸、稀盐酸和沸乙醇。可以从热水中重结晶出联苯胺一水合物。
联苯胺的实验室监测方法
高效液相色谱法(中国环境监测总站,水质)、色谱/质谱法《固体废弃物试验分析评价手册》中国环境监测总站等译、分光光度法《水和废水标准检验法》15版,快速比色法《化工企业空气中有害物质测定方法》。
联苯胺的环境危害
联苯胺遇明火、高热可燃。与强氧化剂可发生反应,产物为:一氧化碳、二氧化碳、氧化氮

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近日,生态环境部发布三项水质检测国家环境保护标准,其中,《水质
联苯胺的测定 高效液相色谱法》和《水质
磺酰脲类农药的测定高效液相色谱法》是由市环境监测中心站主持制定,这两项标准均为首次发布。

农业农村部公告 第169号

2016年1月29日,北京市食品药品监督管理局发布了《2015年执行国家食品药品监管总局食品安全监督抽检情况的公告(第6期)》,该公告涉及多家超市销售的鲜活鱼检出了违禁物质孔雀石绿。

制定国家环境保护标准,必须经过科学严谨的预研、立项、起草、审查、出版等多项程序。市环境监测中心站谭培功研究员及实验分析团队,历经数年艰苦探索,做了大量分析研究工作,认真听取了各方面的意见建议,与国际相关标准进行科学对比,梳理数据、把握规律、优化方法,终于完善了两项标准的实验和验证,编写了编制说明,起草标准文本,完成标准的制定。

根据《兽药管理条例》规定,农业农村部组织制定了《兽药中非法添加药物快速筛查法》并发布,自发布之日起执行。

孔雀石绿,又名碱性绿、孔雀绿,化学名称为四甲基代二氨基三苯甲烷,商品孔雀石绿以孔雀石绿草酸盐、孔雀石绿盐酸盐或孔雀石绿氯化物的形式存在,是一种带有金属光泽的绿色结晶体,常用为杀真菌剂或者染料。长期以来,渔民在运输过程中和存放池内,也常使用孔雀石绿,以预防鱼类的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等,同时可以延长鳞受损的鱼的生命。科研结果表明,孔雀石绿在鱼体内残留时间很长,且具有高毒性、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用。有鉴于此,许多国家将孔雀石绿列为水产养殖禁用药物。2002年5月,我国也将孔雀石绿列入《动物食品禁用的兽药及其化合物清单》中。但是,因其廉价,且治病功效是其他药物“不能替代”的,故利益的驱动使得孔雀石绿并没有完全退出渔业市场。

以保护生态环境和保障人民身体健康为出发点和落脚点,市环境监测中心站通过主持制定国家环境保护标准,推进实行最严格的保护制度,为生态文明建设做出积极贡献。

附件:兽药中非法添加药物快速筛查法

结晶紫,是甲基紫的俗称,又名龙胆紫,是一类三苯基甲烷类工业染料和消毒防腐药,有较好的杀菌作用,具有高效、廉价、易得等优点,作为化学消毒剂被广泛应用于水产养殖疾病防治中。结晶紫具有高毒性、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用,各国也已禁止其在水产养殖业中使用。

《水质 联苯胺的测定 高效液相色谱法》

兽药中非法添加药物快速筛查法

天瑞仪器一直致力于为客户提供更完善的解决方案,LC-310高效液相色谱仪可同时用于水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的检测。

生态环境部印发国家环境保护标准《水质 联苯胺的测定
高效液相色谱法》,自2019年9月1日起实施。

1.1
本方法适用于兽药及其原料与辅料中紫外光谱图库中所列非法添加药物的筛查。

仪器简介

内容节选如下:附全文

1.2
用于紫外光谱图库之外的具有紫外吸收的非法添加药物的筛查时,需进行空白试验和检测限测定,并测定对照品溶液的紫外光谱图。

LC-310高效液相色谱仪是天瑞仪器多年液相色谱研发经验的结晶,具有较高的灵敏度、分离度和可靠性。

本标准规定了测定地表水、地下水、生活污水和工业废水中联苯胺的高效液相色谱法。

照高效液相色谱法测定。

实验部分

本标准为首次发布。

2.1 超高效液相色谱—二极管阵列法

检测原理

本标准自2019年9月1日起实施。

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(ACQUITY UPLC HSS
T3,1.8
µm,2.1×100mm);以水-1mol/L醋酸铵溶液(取醋酸铵77g,加水至1000ml,用冰醋酸调节pH值至5.0)为流动相A,甲醇-1mol/L醋酸铵溶液为流动相B,按下表进行梯度洗脱;流速0.45ml/min;二极管阵列检测器,采集波长范围为200
nm~400 nm,分辨率为1.2 nm,提取波长按需设定。

将样品中残留的孔雀石绿和结晶紫用硼氢化钾还原为其相应的代谢产物隐性孔雀石绿和隐性结晶紫,用乙腈-乙酸铵缓冲溶液混合提取,二氯甲烷液液萃取,固相萃取柱净化,反相色谱柱分离,液相色谱-荧光检测器检测,以保留时间定性,外标法定量。

警告:实验中使用的有机溶剂具有一定的毒性和挥发性,标准物质具有强致癌性,试剂配制和样品前处理过程应在通风橱内进行,操作时应按要求佩戴防护器具,避免接触皮肤和衣物。

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主要仪器、耗材和试剂

当取样体积为150ml,试样定容体积为2.0ml,进样体积为40μl时,方法检出限为0.006μg/L,测定下限为0.024μg/L。

中药固体制剂 取50mg,加甲醇10ml,超声处理10分钟;

LC-310高效液相色谱仪:江苏天瑞仪器股份有限公司;

样品通过阳离子交换固相萃取柱,联苯胺被吸附,用乙酸溶液将联苯胺锁定在固相萃取柱上,用甲醇淋洗除去杂质,再用氨水甲醇溶液进行洗脱,洗脱液浓缩定容后,用具有荧光检测器的高效液相色谱分离检测。根据保留时间定性,外标法定量。

中药液体制剂 取10µl ~20µl,加甲醇10ml,摇匀;

分析天平:精度十万分之一有限公司)

高效液相色谱仪:具荧光检测器。

化药液体制剂 取20µl,加甲醇10ml,摇匀;

超声波清洗器;

色谱柱:填料粒径为5μm,柱长15㎝,内径4.6mm的C18反相色谱柱,或其他等效色谱柱。

其他化药制剂
取50mg,加甲醇10ml,超声处理约10分钟,用甲醇稀释成含有效成分50µg~100µg
/ml的溶液。

超纯水机;

样品瓶:500ml具磨口塞的棕色细口玻璃瓶或带聚四氟乙烯衬垫的棕色螺纹口玻璃瓶。

对照品溶液的配制 用甲醇制成50 ~100µg
/ml的溶液,溶解性差的对照品,可加适量盐酸或氢氧化钾溶液,使其溶解。

旋转蒸发仪;

微量注射器:10μl、50μl和100μl。

测定法 取供试品溶液2
µl注入液相色谱仪,同时记录色谱图与光谱图。通过与紫外光谱图库中对照光谱图最大吸收波长和图形的比对,确定供试品中是否含有相应非法添加药物。

数显高速分散均质机(FJ300-S,上海索映仪器设备有限公司)

氮吹仪

可根据实验结果调整进样量或浓度,使紫外光谱图光滑、特征清晰。

固相萃取装置;

超声波清洗仪:输出功率在180W以上,工作频率为40kHz。

两者光谱图无明显差异,判为可疑阳性结果。

固相萃取柱;

固相萃取装置。

筛查结果呈可疑阳性的样品,需按农业农村部发布的非法添加检查方法标准进一步检验。

漩涡振荡器等。

一般实验室常用仪器和设备。

2.2 液相色谱—二极管阵列法

仪器测试条件

定性分析:根据样品中目标化合物与标准系列中目标化合物的保留时间进行定性,可采用不同波长下的荧光强度比辅助定性,必要时用高效液相色谱-三重四极杆质谱法进行确认。

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Alltima
C18,5µm,4.6×250mm);以磷酸二氢钠溶液(取磷酸二氢钠3.0g,加水1000ml,加三乙胺0.5ml,用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0)∶甲醇为流动相;流速1.0ml/min;二极管阵列检测器,采集波长范围为200
nm~400 nm,分辨率为1.2 nm,提取波长按需设定。

色谱柱:TRC18-X,4.6mm*250mm,5μm;

在本标准推荐的色谱参考条件下,联苯胺的标准色谱图见图 1。

供试品溶液的配制 同2.1。

流动相:乙腈 乙酸铵缓冲液=80 20

定量分析:样品中联苯胺的质量浓度 ρ,按照公式进行计算:

对照品溶液的配制 同2.1。

柱流量:1.3ml/min;

式中:ρ——样品中联苯胺的质量浓度,μg/L;

测定法 取供试品溶液10µl ~20µl注入液相色谱仪,其他同2.1。

柱温:35℃;

ρ1——由校准曲线得到的试样中联苯胺的质量浓度,μg/L;

2.3 液相色谱—二极管阵列法

进样量:20μl;

V1——试样定容体积,ml;

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Alltima
T3,5µm,4.6×250mm);0.2%冰醋酸溶液∶乙腈为流动相;流速1.0ml/min;二极管阵列检测器,采集波长范围为200
nm~400 nm,分辨率为1.2 nm,提取波长按需设定。

检测器:荧光检测器

V——取样体积,ml;

供试品溶液的配制 同2.1。

激发波长:265nm,发射波长:360nm;

D——稀释倍数。

对照品溶液的配制 同2.1。

孔雀石绿和结晶紫标准溶液色谱图

结果表示:当测定结果小于 1 μg/L 时,保留小数点后三位;当测定结果大于等于
1 μg/L 时,保留三位有效数字。

测定法 取供试品溶液10µl ~20µl注入液相色谱仪,其他同2.1。

小结

实验中产生的有机废液应分类收集、集中保管,并做好相应标识,委托有资质的单位进行处理。

2.4 液相色谱—二极管阵列法

LC-310高效液相色谱仪测定水产品中孔雀石绿和结晶紫的残留量,灵敏度高,样品干扰小,本方法条件下的孔雀石绿和结晶紫的方法检出限均不超过0.5μg/kg,完全满足国标及水产行业的管控要求。

《水质 磺酰脲类农药的测定高效液相色谱法》

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Atlantis
C18,5µm,4.6×250mm);以磷酸溶液(取磷酸3ml,加水1000ml,用三乙胺调节pH值至3.0±0.1,加乙腈53ml,摇匀)为流动相A,乙腈为流动相B,甲醇为流动相C,按下表进行梯度洗脱;流速1.0ml/min;二极管阵列检测器,采集波长范围为200
nm~400 nm,分辨率为1.2 nm,提取波长按需设定。

警告:实验中所用的有机溶剂和标准溶液具有一定的毒性和挥发性,试剂配制和样品前处理过程应在通风橱内进行,操作时应按规定要求佩戴防护器具,避免接触皮肤和衣物。

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1适用范围

供试品溶液的配制 同2.1。

本标准规定了测定水中磺酰脲类农药的高效液相色谱法。

对照品溶液的配制 同2.1。

本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中烟嘧磺隆、噻吩磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆、醚苯磺隆、氯磺隆、胺苯磺隆、苄嘧磺隆、吡嘧磺隆和氯嘧磺隆等10种磺酰脲类农药的测定。

测定法 取供试品溶液10µl ~20µl注入液相色谱仪,其他同2.1。

采用直接进样,进样体积为 50µl时,方法检出限为
0.006mg/L——0.009mg/L,测定下限为0.024
mg/L——0.036mg/L;采用液液萃取或固相萃取,取样
250ml,试样的定容体积为1.0ml,进样体积为 20μl
时,方法检出限为0.05µg/L——0.09µg/L,测定下限为
0.20µg/L——0.36µg/L。详见附录A。

2 规范性引用文件

本标准内容引用了下列文件或其中的条款。凡是不注日期的引用文件,其有效版本适用于本标准。

HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范

HJ/T 164 地下水环境监测技术规范

3 方法原理

样品经直接进样、液液萃取或固相萃取处理后,用具有紫外检测器的高效液相色谱分离检测。根据保留时间定性,外标法定量。

4 干扰及消除

4.1
当水样中含有干扰目标化合物测定的有机物时,可以通过改变色谱条件或用硅胶柱净化消除部分干扰。

4.2
在本标准的条件下,苯磺隆与苄嘧磺隆、醚磺隆与甲磺隆、乙氧磺隆与氯嘧磺隆、3,6-二氯
-2-甲氧基苯甲酸与甲磺隆、4–丁酸与氯嘧磺隆色谱峰重叠,对测定有干扰。

5 试剂和材料

除非另有说明,分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂,实验用水为不含目标物的纯水。